Laboratorio oncologia ed ematologia

 Accanto a tecniche classiche di citogenetica come l'analisi del cariotipo vengono eseguite tecniche di citogenetica molecolare (FISH: ibridazione in situ fluorescente) con sonde centromeriche, cosmidiche e painting per una più approfondita caratterizzazione diagnostica o per una più sensibile valutazione della risposta alla terapia, e sonde per specifiche traslocazione geniche coinvolte in malattie ematologiche ed oncologiche pediatriche. In particolare sono a disposizione del laboratorio sonde specifiche. Inoltre viene eseguito il DEB test per caratterizzare citogeneticamente le patologie da fragilità cromosomica.

Sono state messe a punto metodiche di biologia molecolare per lo studio dell'assetto genico delle popolazioni neoplastiche. Tali metodologie vengono applicate allo studio dell'RNA di pazienti pediatrici affetti da leucemie linfoblastiche e mieloidi acute e da tumori solidi.     
In particolare vengono eseguite le seguenti determinazioni qualitative mediante RT-PCR:

Vengono eseguite indagini molecolari atte a monitorare l'attecchimento post trapianto con la tecnica della valutazione dei microsatelliti (STR) per i pazienti sottoposti a trapianto di cellule staminali emopoietiche allogeniche.          
È inoltre possibile eseguire sequenziamento di regioni d'interesse di DNA per valutare l'eventuale presenza di mutazioni puntiformi o di SNPs.

 Il laboratorio è dotato di un citofluorimetro a flusso FacsCalibur che permette di eseguire avanzate tecniche citofluorimetriche. Le principali aree di applicazione di questa metodica nel nostro laboratorio sono:

• la caratterizzazione immunofenotipica alla diagnosi, alla recidiva  e durante il follow-up delle leucemie linfoidi e mieloidi ed eventuale infiltrazione midollare da parte di alcuni tumori solidi.
• lo studio della malattia residua minima (LAL, LAM)   
• la valutazione quantitativa di cellule CD34+ in corso di raccolta di cellule staminali ematopoietiche/espianto di midollo osseo.    
• monitoraggio del recupero immunologico post-trapianto di cellule staminali ematopoietiche

Il laboratorio si occupa della criopreservazione di cellule staminali midollari e periferiche e del loro scongelamento al momento della reinfusione. Vengono inoltre criopreservate le cellule staminali di sangue cordonale per donazioni mirate.            
Nell'ambito del trapianto allogenico da donatore familiare o da donatore volontario HLA compatibile si effettuano le necessarie manipolazioni in presenza di incompatibilità di gruppo ABO quali:

• Deplezione dei globuli rossi            
• Deplasmazione.       

Vengono inoltre effettuate tecniche di manipolazione ex vivo su sangue midollare e periferico quali:

• Selezione positiva/negativa mediante biglie magnetiche (es. di cellule CD34+, CD56+)
• Purging farmacologico

Il laboratorio è inoltre dotato di una criobanca costruita seguendo le normative vigenti per lo stoccaggio in azoto liquido delle cellule staminali emopoietiche criopreservate  che sposa la massima sicurezza per gli operatori con il continuo monitoraggio della temperatura a cui devono essere conservate le sacche di cellule staminali emopoietiche.

Nella sezione di laboratorio dislocata nell'area di Day-Hospital vengono inoltre eseguiti lo striscio e la colorazione di vetrini di sangue periferico, midollare e di citocentrifugati di liquido cefalorachidiano. La lettura e la valutazione morfologica di questi preparati, fondamentale per la caratterizzazione alla diagnosi e durante il follow-up dei pazienti, viene effettuata da personale medico esperto.

Il laboratorio usufruisce di una strumentazione scientifica all'avanguardia. Tra le attrezzature più importanti a disposizione dello staff vi sono:        

• un citofluorimetro Facs Calibur;
• due sequenziatori automatici in fluorescenza per analisi di sequenziamento di DNA e marcatori genetici polimorfici;
• strumento per la valutazione quantitativa delle reazioni di amplificazione del DNA,
• un microscopio a fluorescenza dotato di software idoneo alle analisi citogenetiche;,
• cell factory idonea alla manipolazione di cellule staminali per terapia cellulare.
• un contaglobuli;
• piattaforma Affymetrix per studi di espressione genica e genotyping con microarray.

Il personale del laboratorio è coinvolto nello svolgimento di programmi di ricerca e partecipa, compatibilmente con lo svolgimento dell'attività assistenziale, a Corsi di aggiornamento o Convegni sia presso l'Istituto che fuori sede. A completamento della continua educazione formativa partecipa ad Congressi nazionale ed internazionali apportando contributi scientifici.

Rilevante parte del lavoro di ricerca che viene svolto è rappresentata stesura di pubblicazioni scientifiche su riviste nazionali ed internazionali.

Presso il laboratorio del Modulo Organizzativo di Oncologia ed Ematologia Pediatrica "Lalla Seràgnoli" frequentano per periodi variabili medici, biologi o tecnici interessati all'apprendimento delle metodiche che vi si svolgono. Vengono assistiti inoltre studenti per la preparazione di tesi di laurea, triennale o specialistica, tesi di Dottorato di Ricerca e Specializzazione afferenti alle Facoltà di Medicina e Chirurgia, Scienze Matematiche Fisiche e Naturali.

L'attività di ricerca svolta dal personale di laboratorio riguarda la comprensione delle caratteristiche biologiche e patogenetiche delle malattie neoplastiche, lo sviluppo di nuovi farmaci mirati, studi di farmacogenetica e farmacogenomica e messa a punto di protocolli di terapia cellulare.